[導讀]一次給進修生講課，我問：“你們會使用顯微鏡嗎?”，聽著認識好笑!曹老師問這么幼稚的問題!全場的舉手，一致回答“會”。我又問：“誰懂得合軸調節?”一時啞口無言。我再問“哪一位能夠說一說什么是齊焦精度?等高轉換?”也是沉默不語。我問：“有沒有看顯微鏡后頭腦發暈?模糊不清?”大家反應活躍，這個說：“我曾經有過!那個說就是不明白怎么回事?”議論紛紛。等大家安靜下來，開始了我的講課內容。

一個戰士對于手中的武器一定了如指掌，才能發揮*大效果。一個醫療戰線的偵察兵一定要的顯微鏡了如指掌，才能發揮*大效能。而我們對習以為常的手中武器是不是如此，希望盡量為大家補課，已經明白的深入討論其中的奧秘，沒有清楚的咱們一起溫故知新。

資料來源：曹興午.醫用顯微鏡與顯微攝影.李滌生，陳宏礎，石自明.臨床檢驗學(高等醫學院校檢驗系教材).人民衛生出版社.1987,245-280.

一、 顯微鏡的轉換盤的精度考量，是以定位精度和齊焦精度為標準

1.定位精度：是指物鏡鏡頭處于工作狀態時，轉化器(轉化盤)必須明確與穩定，它的視野中心對于其他物鏡，處于同樣工作狀態時，視野中心的偏移量而言，一定是一致的。換句話說，就是轉換哪一個鏡頭，都應該在一個相同的位置，不能夠有偏移。

定位精度調整與觀察：物鏡在轉換器轉換以后，用不同的放大倍率的物鏡，觀察物鏡的光軸的不重合。可先用10×物鏡調焦后，以其中心為基準，再轉換到40×物鏡時，中心移位不得超過視場的半徑的2/3，以40×物鏡為基準，轉換到100×物鏡時，中心位移不得超過視場半徑的3/4。顯微鏡的精密度越高，位移越小，**研究顯微鏡甚至是一致，這是考量顯微鏡優劣的標準之一，更是考量使用者的水平標準。為什么?這么說?我們80%的使用者，都是以手擰著鏡頭進行倍率的轉換，長期多次、如此操作，導致鏡頭的銜接絲扣損傷和松動，破壞了其精度造成的后果。正確使用是以手持轉換盤(上面刻有條紋顯示)轉換鏡頭，保持顯微鏡的定位精度。

2.齊焦精度：指的是一個顯微鏡物鏡鏡頭，調節在一個工作的位置后，再轉換另外一個鏡頭的時候，應該在不重新調節焦距的情況下，就可以看到物象。例如從低倍轉換到高倍鏡頭觀察時，仍然可以看到標本的輪廓，其精確度在0.03毫米范圍內，允許調焦就可以觀察清楚，否則為齊焦精度不夠。油鏡的觀察可以與其鏡頭不必齊焦，因為介質不同，一個是干系統，一個是油浸系統。但是注意，在油鏡轉換時不要使鏡頭碰到蓋片，如果碰到的時候，說明蓋片厚度超過了規定的厚度，屬于不合格產品，其蓋片厚度要求，在油鏡頭上明確書寫。

3.物鏡的設計與轉換盤的銜接、誤差是以等高轉換考量：更是考量使用者操作正確與否的一個指標。

等高轉換：是指從低倍鏡頭轉換到高倍鏡頭的時候，如果物鏡鏡頭是顯微鏡的原配，所有載物片、蓋玻片又完全符合標準要求，在齊焦精度無誤的情況下，一般都可以進行自由的“等高轉換”。即利用轉換器，直接將高倍鏡頭旋入光軸，只要將微動調節稍微調節，就可以清晰觀察到物象。如果達不到如此狀態，就需要檢查蓋玻片、載玻片的厚度是不是超過標準，這兩項都沒有問題，就要考慮顯微鏡的設計問題，必須與廠家聯系解決。筆者在中日醫院在建院驗收130臺日本顯微鏡就發現類似問題。如果使用者在使用顯微鏡時候，在轉換鏡頭時，不是手持轉換盤轉換，常常是手持物鏡鏡頭，進行觀察倍率的更換，如低倍鏡轉換高倍鏡，就扭住鏡頭進行轉換，實際是一種常見的操作錯誤，長期如此使用導致鏡頭的絲扣與轉換盤吻合精度出現誤差，使得等高轉換出現偏移，不僅影響觀察更造成顯微鏡無法使用。筆者曾經就這問題對使用者進行調查，約90%都是如此使用，這樣就減少了顯微鏡的服務年限。筆者自己購置的一臺顯微鏡，退休后仍然每天使用，經30年后，顯微鏡仍然發揮*大效應繼續工作。

4、微動調節聚焦分度計算：我們每天離不開使用顯微鏡，看標本使用微調也習以為常，從來不考慮分度計算。微調的總調節距離一般為1.8~3毫米，經常為2毫米(在微調手輪上，可以看到的刻度)，由微動手輪控制，旋轉手輪，光學系統能夠非常緩慢的移動。如上升或是下降調節的距離為2毫米，如果手輪轉動15周，每周50分度，那么每調節一個分度，光學系統的上升或是下降的距離為：2毫米÷(15×50)=0.0027毫米=2.7μm。這樣就可以利用微調分度測量組織標本的厚度。

5、微調的誤差：微調在調焦的范圍內，在轉動手輪時，物象不應該有搖動或是晃動現象，即使存在的時候，*大搖擺角度不>1;用10×物鏡觀察時，在景深的范圍內，旋轉微調手輪，物體的平面位置位移在0.05毫米;微調在上升與下降，手輪轉動，應允許連續均勻動作，不應該產生滯留、停頓或是跳動發生。如果是發生說明顯微鏡出現了故障，在齒輪部位，如果新購入的顯微鏡說明精度誤差大，屬于不合格產品。

6、合軸調節即中心調節：是考量操作者對顯微鏡知識了解和會不會操作的一個重要指標;是發揮顯微鏡*大性能的一個重要因素;也是驗收一臺顯微鏡是否合格的一項標準。

合軸調節：使目鏡、物鏡和聚光器的主光軸和可變光闌的中心，必須完全重合在一條直線上，稱為光學合軸。如果光軸不吻合或不正，會增大物象的象差和彗差，導致觀察物體分辨率降低和清晰度下降。

合軸調節主要是調節聚光器的位置，因為目鏡與物鏡在出廠時就已經調整好了。有些顯微鏡上的聚光器上，沒有光軸調節螺絲(老式顯微鏡)，可以扭動聚光器進行光軸調節。現代顯微鏡在聚光器的支架上，兩旁都有一個光軸校正螺絲，左右手，擰著這兩個螺絲，可以進行合軸調節，使聚光器、物鏡、目鏡調整在一條光軸上，進行合軸調節。另外，有的顯微鏡在聚光器的支架上，有三個相隔120度角頂絲，其中一個裝有彈簧的可以伸縮，另外兩個為螺絲，可以旋動，在調整三個螺絲，使聚光器在水平面移動位置，從而進行光軸調整，進行合軸。如果合軸不好或是合軸不上，就需要檢查是否光柵的固定螺絲松動，轉換器的定位失靈。

調整方法：將標本放在載物臺上，用10×物鏡進行對焦。將聚光器光柵全部打開，調整分光鏡的角度，使視場的光亮度*亮，將光柵關閉到*小，上下移動聚光器，將視野收縮聚焦對準標本上。如果視野的收縮象不在正中間，即可調節聚光器的光軸校正螺絲使匹配同心為止。將物鏡轉換到 40×，調節光柵的大小，使視野里的原來收縮象和視野幾乎相等。如若仍然處于偏心時，就需要擰動聚光器的螺絲進行正確合軸。另外，也可以使用拔掉目鏡，從鏡筒上面直接觀察，將光柵關閉*小時，光柵孔的映像只有一個亮點，正好落在物鏡的中心，即可合格。如果不是，可調節下面聚光器調整，觀察光線偏移進行調整。

說明：1合軸調節使視野影像重合;2與調節聚光器光亮大小一致。

7、瞳孔距離調節：目前大多數醫院的顯微鏡都是雙目顯微鏡，大家在應用時一定要先調節瞳孔距離。有的學生問我：“曹老師，我看完了顯微鏡為什么頭痛?心里非常不舒服?”，我告訴他，“是由于你沒有調整好你的瞳孔距離導致的結果，我教你如何調整瞳孔距離!”

在顯微鏡的上都有調節裝置，因為每個觀察者的瞳孔距離都是不同的，為此，在使用時必須首先調整瞳孔距離。圖就像配置眼鏡時，必須給你測定瞳孔距離一樣，我們看顯微鏡一定要先調節瞳距。在兩個目鏡的中間的間隔是可以延長平行線進行調節，一般在目鏡支撐的鏡架上，刻有53~73的數字，是調整瞳距的標記數字。在調節過程中，物象的象面位置有所變化，這個變化量有些顯微鏡可以自動補償，大部分需要人工加以補償，即從上面所刻的標尺數值上，讀出你的瞳孔距離的數值，然后轉動右側目鏡的套筒，使其上面的讀數與瞳孔距離的數值一致，然后用右眼對好焦點找好物象，再旋轉左側目鏡套筒，使左右兩眼的物象重合，焦點一致。這樣調節后，不僅可以保證物鏡的齊焦精度，也可以使觀察者長時間使用不會漂亮，更可以保護視力。